提交日期

2019

文档类型

论文

学位名称

法医学硕士学位

部门

法医科学

顾问

大卫·圣彼得罗

委员会成员

克莱尔·格林

委员会成员

乔尔·达夫

LCSH

聚合酶链反应体液分析

摘要

体液检测有助于解释犯罪现场发生的事件。体液的鉴定也会影响通过DNA对基因检测结果的解释。发现体液的来源对于支持或反驳涉及犯罪的陈述很重要。目前，还没有一种通用的验证性测试，用于同时准确和具体地识别这些不同的体液。在涉及混合物或样本量有限的情况下，开发一种能够满足这些标准的技术是至关重要的。

DNA甲基化是在DNA的胞嘧啶碱基上加上一个甲基。甲基化影响转录的功能作用，进而影响基因表达。因此，整个身体的各种组织显示出不同的甲基化模式，因为它们需要不同的特征来表达最佳功能。最近的研究发现，多种体液具有潜在的甲基化特异性。这些差异可以为同时识别多种体液的简化通用验证试验奠定基础。

经机构审查委员会(IRB)批准后，经知情书面同意，从5名女性参与者中收集了血液、唾液、阴道液和经血。用QIAamp®DNA调查员试剂盒从这些体液中提取基因组DNA。基因组DNA用Qiagen Epitect®bisulfite Kit进行亚硫酸氢盐转化。该试剂盒将未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶，允许甲基化差异进行分析。为先前确定的血液、唾液和阴道液甲基化特定序列定制了独特颜色的荧光探针。使用Applied Biosystems®7500实时qPCR仪和7500系统SDS软件(v1.2.2f2)对样品进行分析，以确定每种体液在指定探针序列中的周期阈值。用交替探针序列收集每种体液的CT值，以比较甲基化表达的差异，以及任何可能的交叉反应性。

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